碧云天的脂質(zhì)氧化MDA檢測(cè)試劑盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）是一種用于測(cè)量脂質(zhì)氧化水平的試劑盒。它采用一種基于MDA和硫代ba比妥酸（thiobarbituric acid, TBA）反應(yīng)的顯色方法來(lái)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物，然后通過(guò)比色法對(duì)血漿、血清、尿液、動(dòng)植物組織或細(xì)胞裂解液中的MDA進(jìn)行定量檢測(cè)。這種試劑盒被廣泛應(yīng)用于脂質(zhì)氧化水平的檢測(cè)。

MDA（丙二醛）是生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物。當(dāng)動(dòng)物或植物細(xì)胞經(jīng)受氧化應(yīng)激時(shí)，脂質(zhì)氧化便發(fā)生。脂肪酸在氧化過(guò)程中會(huì)逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物，其中包括MDA。通過(guò)測(cè)量MDA的水平，我們可以了解脂質(zhì)氧化的程度，因此MDA的測(cè)定被廣泛用作脂質(zhì)氧化水平的指標(biāo)。除了氧化應(yīng)激反應(yīng)外，生物體內(nèi)的其他生化反應(yīng)也會(huì)產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase也能催化其產(chǎn)生，但只要在測(cè)定時(shí)設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照，就能觀察到脂質(zhì)氧化水平的變化。

以碧云天的脂質(zhì)氧化MDA檢測(cè)試劑盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）為工具，通過(guò)檢測(cè)MDA水平，可以準(zhǔn)確評(píng)估生物體的脂質(zhì)氧化程度。這種試劑盒符合脂質(zhì)氧化水平檢測(cè)的需要，并且在科學(xué)研究和臨床應(yīng)用中得到廣泛應(yīng)用。

使用說(shuō)明：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 血漿、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測(cè)定。

b. 組織或細(xì)胞可以使用PBS裂解液進(jìn)行勻漿或裂解。對(duì)于組織，組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%；對(duì)于細(xì)胞，每100萬(wàn)細(xì)胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后，10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測(cè)定。對(duì)于一些特殊樣品，離心不能獲得澄清的上清溶液的，可以使用0.2微米孔徑的過(guò)濾器過(guò)濾以獲得澄清的樣品溶液。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進(jìn)行操作。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. TBA儲(chǔ)存液的配制：稱取適量TBA，用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲(chǔ)存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制，最終濃度即為0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用，可以加熱到70℃以促進(jìn)溶解。TBA儲(chǔ)存液較難溶解，需加熱到70℃，并通過(guò)劇烈Vortex以促進(jìn)溶解。配制好的TBA儲(chǔ)存液室溫避光保存，至少3個(gè)月內(nèi)有效。

3. 樣品測(cè)定：

a. 在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入0.1ml勻漿液、裂解液或PBS等適當(dāng)溶液作為空白對(duì)照，加入0.1ml上述不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入0.1ml樣品用于測(cè)定；隨后加入0.2ml MDA檢測(cè)工作液。

b. 混勻后，100℃或沸水浴加熱15分鐘。加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進(jìn)行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔。zui方便和準(zhǔn)確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀。

c. 水浴冷卻至室溫，1000g室溫離心10分鐘。取200微升上清加入到96孔板中，隨后用酶標(biāo)儀在532nm測(cè)定吸光度。如果不方便測(cè)定532nm的吸光度，也可以測(cè)定530-540nm之間的吸光度。可以設(shè)定450nm為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

d. MDA含量的計(jì)算：對(duì)于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得MDA的摩爾濃度，對(duì)于細(xì)胞、或組織樣品，計(jì)算出樣品溶液中的MDA含量后，可以通過(guò)單位重量的蛋白含量或組織重量等來(lái)表示最初樣品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

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