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022-66387942產(chǎn)品名稱:南京建成丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測試盒微板法(C009-2-1)現(xiàn)貨供應(yīng)
產(chǎn)品貨號:C009-2-1
產(chǎn)品品牌:南京建成
產(chǎn)品規(guī)格:96T
操作過程:
1、樣本前處理:
①、血清(漿)及其它液體樣本待測:直接測定。
②、動(dòng)物組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積 (mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件 下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液待測。
③、培養(yǎng)細(xì)胞樣本前處理:將收集好的細(xì)胞用等滲緩沖液(推 薦 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)清洗 1~ 2 次;1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清,留細(xì)胞沉淀,加入勻 漿介質(zhì)(推薦加入 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生 理鹽水),冰水浴條件下超聲破碎或手動(dòng)勻漿,制備好的 勻漿液不離心,待測。
2、操作表:
測定孔 | 對照孔 | |
基質(zhì)液(μL)37℃已預(yù)溫 | 20 | 20 |
待測樣本(μL) | 5 | |
37℃反應(yīng) 30 分鐘 (測定孔每吸取一個(gè)樣本,將吸嘴伸入孔板底部基質(zhì)液中, 反復(fù)吸打混勻,但注意不要吸入氣泡) | ||
2,4—二硝基苯肼液(μL) | 20 | 20 |
待測樣本(μL) | 5 | |
37℃反應(yīng) 20 分鐘 (對照孔每吸取一個(gè)樣本,將吸嘴伸入孔板底部液體中,反 復(fù)吸打混勻, 但注意不要吸入氣泡) | ||
0.4mol/L 氫氧化鈉液(μL) | 200 | 200 |
輕輕水平搖動(dòng) 96 孔板混勻,室溫放置 15 分鐘,波長 510nm,酶標(biāo)儀測定各孔 OD 值,以絕對 OD 值(測定孔 OD 值減去對照孔 OD 值),查標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得相應(yīng)的 ALT/GPT 活力單位。 |
注意事項(xiàng):
1、比色法中常用的有賴氏(Reitman-Frankel)法及金氏(King)法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù),是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門氏分光 光度法(速率法)作對比測定求得的。以卡門氏單位報(bào)告結(jié)果,比較準(zhǔn)確。 卡門氏單位定義:1mL 液體,反應(yīng)液總?cè)萘?/span>3mL,波長340nm,1cm 光徑,25℃,1min 內(nèi)所生成的丙酮酸,使NADH氧化成 NAD+而引起吸光度每下降0.001 為一個(gè)單位(1卡門氏單位=0.482 U/L,25℃)。
2、一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少,血清對照孔吸光度值接近試劑空白孔(以雙蒸水代替血清,其他和對照孔同樣操作)。所以,成批標(biāo)本測定時(shí),一般不需要每一標(biāo)本都作本身血清對照孔,以試劑空白孔代替即可,但對脂血、黃疸或溶血血清,每份標(biāo)本應(yīng)作對照孔。
3、酶活力超過 150 卡門氏單位時(shí),用生理鹽水稀釋血清后重測。
4、應(yīng)將一般血清的對照孔(或稱標(biāo)本空白孔)的吸光度作為日常質(zhì)控的指標(biāo)之一;如相差大,可考慮α-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。
5、血清中 ALT 在室溫(25℃)可保存2 天,在0~4℃可保存一周,在-25℃可保存 1 個(gè)月。
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
C009-2-1 | Alanine aminotransferase Assay Kit | 96T |
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